Plasmide CRISPR/Cas9 KO Ribosomal Protein L26 (h): sc-406835

Présentation

RPL26 code la protéine ribosomique L26, un composant structural de la grande sous-unité ribosomique 60S qui contribue à l’assemblage du ribosome et à la traduction efficace des ARNm cytosoliques. Au-delà de son rôle central dans la synthèse protéique, RPL26 a été associé à la régulation de programmes de traduction induits par le stress, notamment via la modulation de la signalisation de la voie p53 par des effets sur la traduction de transcrits clés. Une perturbation de l’homéostasie des protéines ribosomiques peut déclencher des réponses de stress ribosomique et modifier le contrôle du cycle cellulaire, ce qui justifie l’étude de RPL26 dans des contextes tels que la stabilité du génome, l’apoptose et le contrôle traductionnel altéré dans le cancer et d’autres troubles prolifératifs.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Ribosomal Protein L26 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RPL26 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RPL26, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RPL26 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Ribosomal Protein L26.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RPL26 pour l'étude de la signalisation de Ribosomal Protein L26, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RPL26 essentiels à la fonction de Ribosomal Protein L26
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RPL26 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Ribosomal Protein L26 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Ribosomal Protein L26 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RPL26. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Ribosomal Protein L26 plasmide HDR (h) et le Ribosomal Protein L26 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RPL26 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RPL26 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.