Plasmide CRISPR d'Activation (h) Ribosomal Protein L13A: sc-403494-ACT

RPL13A code la protéine ribosomique L13A, un composant central de la grande sous-unité ribosomique 60S, nécessaire à l’assemblage du ribosome et à une élongation de la traduction efficace. Au-delà de son rôle structural au sein du ribosome, L13A participe à des programmes de contrôle traductionnel liés au stress cellulaire et à la signalisation inflammatoire, notamment des voies dépendantes de l’interféron qui modulent la traduction sélective d’ARNm. Une biogenèse ribosomique altérée et une synthèse protéique dérégulée sont des caractéristiques fréquentes des états prolifératifs et d’adaptation au stress, ce qui rend RPL13A pertinent pour l’étude du contrôle de la croissance cellulaire et de la protéostase. En tant que gène ribosomal largement exprimé, RPL13A est aussi souvent utilisé comme gène de référence dans les analyses d’expression génique, et sa régulation peut éclairer l’interprétation des remaniements globaux de la traduction.

Ribosomal Protein L13A Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RPL13A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Ribosomal Protein L13A Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RPL13A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RPL13A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Ribosomal Protein L13A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RPL13A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Ribosomal Protein L13A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Ribosomal Protein L13A dans les cellules tumorales présentant une expression de RPL13A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.