Plasmide CRISPR/Cas9 KO Riboflavin kinase (h): sc-418359

Présentation

Le gène humain **RFK** code la riboflavine kinase, une enzyme cytosolique qui phosphoryle la riboflavine (vitamine B2) en flavine mononucléotide (FMN), fournissant un précurseur essentiel à la biosynthèse de la flavine adénine dinucléotide (FAD). En contrôlant la disponibilité intracellulaire de FMN/FAD, RFK soutient des réactions d’oxydo‑réduction dépendantes des flavoprotéines, qui influencent le métabolisme oxydatif mitochondrial, la défense antioxydante et, plus largement, la bioénergétique cellulaire. Des perturbations de l’utilisation de la riboflavine et de l’homéostasie des cofacteurs flaviniques ont été associées à des dysfonctionnements métaboliques et à des phénotypes liés au stress oxydant, ce qui fait de RFK un nœud pertinent pour étudier l’enzymologie dépendante des vitamines. La fonction de RFK est donc pertinente pour des travaux sur les processus mitochondriaux, la signalisation redox et la régulation nutriment–cofacteur dans des modèles de cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Riboflavin kinase (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RFK dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RFK, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RFK à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Riboflavin kinase.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RFK pour l'étude de la signalisation de Riboflavin kinase, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RFK essentiels à la fonction de Riboflavin kinase
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RFK pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Riboflavin kinase plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Riboflavin kinase plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RFK. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Riboflavin kinase plasmide HDR (h) et le Riboflavin kinase (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RFK pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RFK définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.