Plasmide Double Nickase (h) Rhodanese: sc-405813-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Rhodanese correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Rhodanese Double Nickase (h) et le plasmide Rhodanese Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant TST. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Rhodanese Antibody (G-7): sc-271883
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Rhodanese | sc-405813-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Rhodanese | sc-405813-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **TST** code la **rhodanèse** (thiosulfate sulfurtransférase), une sulfurtransférase mitochondriale qui catalyse le transfert de soufre « sulfane » du thiosulfate vers le cyanure, générant du thiocyanate et contribuant à la détoxification cellulaire. La rhodanèse participe aussi au trafic du soufre lié à l’homéostasie des clusters fer–soufre et à l’équilibre rédox, des processus qui s’entrecroisent avec le métabolisme mitochondrial et les réponses au stress oxydant. Des altérations de l’activité de **TST** ont été associées à des signatures de dysfonction mitochondriale et à des phénotypes métaboliques dans des tissus à forte capacité oxydative, ce qui étaye sa pertinence pour l’étude de l’adaptation au stress et de la régulation bioénergétique. En tant qu’enzyme mitochondriale, la rhodanèse constitue un point d’entrée accessible pour examiner comment le métabolisme du soufre module la sulfhydration du protéome et la signalisation en aval.
Rhodanese Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TST dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TST. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TST. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TST.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.