Plasmide CRISPR/Cas9 KO RHOBTB3 (h): sc-406242

Présentation

RHOBTB3 code une GTPase atypique de la famille Rho dotée de domaines BTB, qui agit comme adaptateur reliant le trafic membranaire au renouvellement des protéines dépendant de l’ubiquitine. RHOBTB3 a été impliquée dans l’organisation du Golgi et des endosomes, le transport vésiculaire et la régulation de la progression du cycle cellulaire via des interactions avec des complexes ligase E3 de l’ubiquitine basés sur Cullin3. En influençant le trafic intracellulaire et la protéostasie, RHOBTB3 peut moduler les sorties de signalisation qui dépendent du recyclage des récepteurs et de l’activité compartimentée des petites GTPases. La dérégulation de ces processus a été associée à des phénotypes de prolifération et de migration altérés rapportés dans des études liées au cancer, ce qui soutient sa pertinence pour la recherche en oncologie mécanistique et en biologie cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RHOBTB3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RHOBTB3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RHOBTB3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RHOBTB3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RHOBTB3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RHOBTB3 pour l'étude de la signalisation de RHOBTB3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RHOBTB3 essentiels à la fonction de RHOBTB3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RHOBTB3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RHOBTB3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le RHOBTB3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RHOBTB3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RHOBTB3 plasmide HDR (h) et le RHOBTB3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RHOBTB3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RHOBTB3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.