Plásmido Doble Nickase (h) RhoB: sc-400875-NIC

RHOB codifica la pequeña GTPasa RhoB, un regulador asociado a membrana de la dinámica de la actina y del tráfico vesicular, que alterna entre estados unidos a GDP y a GTP para controlar la forma celular, la adhesión y la motilidad. RhoB integra señales aguas abajo de los receptores de factores de crecimiento y de las vías de estrés celular, influyendo en el transporte endosomal, el recambio de receptores y la remodelación del citoesqueleto mediante redes efectoras de la familia Rho. Participa en procesos como la migración, la función de barrera y las respuestas apoptóticas o adaptativas al estrés, vinculando el tráfico de membrana con salidas transcripcionales y del citoesqueleto. La señalización desregulada de RHOB se ha asociado con cambios en el comportamiento invasivo y en las respuestas al estrés terapéutico en modelos de cáncer, además de funciones más amplias en contextos vasculares e inflamatorios.

RhoB El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus RHOB en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de RHOB. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de RHOB. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con RHOB alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.