Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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RhoB Double Nickase Plasmid (h): sc-400875-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das RhoB Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- RhoB Double-Nickase-Plasmid (h) und RhoB Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf RHOB abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: RhoB: sc-8048
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
RhoB Double Nickase Plasmid (h) | sc-400875-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RhoB Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400875-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RHOB kodiert die kleine GTPase RhoB, einen membranassoziierten Regulator der Aktindynamik und des vesikulären Transports, der zwischen GDP- und GTP-gebundenen Zuständen wechselt und so Zellform, Adhäsion und Motilität steuert. RhoB integriert Signale stromabwärts von Wachstumsfaktorrezeptoren und zellulären Stresswegen und beeinflusst über Effektor-Netzwerke der Rho-Familie den endosomalen Transport, den Rezeptorumsatz und die Umgestaltung des Zytoskeletts. Es ist an Prozessen wie Migration, Barrierefunktion sowie apoptotischen oder stressadaptiven Antworten beteiligt und verknüpft Membrantransport mit transkriptionellen und zytoskelettalen Outputs. Eine Fehlregulation der RHOB-Signalgebung wurde in Krebsmodellen mit verändertem invasivem Verhalten und Reaktionen auf Therapienstress in Verbindung gebracht, ebenso wie mit breiteren Rollen in vaskulären und entzündlichen Kontexten.
RhoB Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des RHOB-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von RHOB abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die RHOB-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit RHOB-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.