Plasmide CRISPR/Cas9 KO RhoB (h): sc-400875

Présentation

RHOB code pour RhoB, une petite GTPase prénylée de la famille Rho qui régule la dynamique du cytosquelette d’actine, le trafic endocytique et le renouvellement des récepteurs membranaires. RhoB alterne entre des états liés au GDP et au GTP afin de moduler des nœuds de signalisation associés à l’adhésion et à la migration cellulaires, au transport vésiculaire et aux réponses au stress, avec des liens fonctionnels vers des voies incluant Rho/ROCK ainsi que des processus plus larges influencés par les voies MAPK et PI3K. Contrairement à des GTPases Rho étroitement apparentées, RhoB est enrichie sur les membranes endosomales et est fréquemment induite en situation de stress cellulaire, ce qui en fait un médiateur clé de la compartimentation des signaux. Des altérations de l’expression ou de l’activité de RHOB ont été associées à des phénotypes liés au cancer, à la signalisation inflammatoire et à la biologie vasculaire, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la prolifération, de l’invasion et de la signalisation dépendante des récepteurs.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RhoB (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RHOB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RHOB, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RHOB à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RhoB.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RHOB pour l'étude de la signalisation de RhoB, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RHOB essentiels à la fonction de RhoB
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RHOB pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RhoB plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le RhoB plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RHOB. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RhoB plasmide HDR (h) et le RhoB (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RHOB pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RHOB définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.