Plasmide CRISPR d'Activation (h) RhoB: sc-400875-ACT

Le gène humain **RHOB** code **RhoB**, une petite GTPase prénylée de la famille Rho, qui agit comme régulateur à réponse rapide du remodelage du cytosquelette d’actine, du trafic endosomal et du renouvellement des récepteurs membranaires. RhoB intègre les signaux issus des récepteurs aux facteurs de croissance et des voies de stress cellulaire afin de moduler la dynamique des adhérences focales, la forme cellulaire et la motilité via des effecteurs en aval qui s’inscrivent dans des programmes associés à ROCK et aux formînes. Elle contribue également aux réponses transcriptionnelles et de survie en influençant les sorties des voies MAPK et PI3K/AKT, reliant la signalisation proximale à la membrane aux décisions nucléaires. Une expression ou une régulation altérée de **RHOB** a été associée à des phénotypes liés au cancer, notamment l’invasion, les réponses au stress thérapeutique et des modifications de la susceptibilité à l’apoptose, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques sur la plasticité des cellules tumorales et l’adaptation au microenvironnement.

RhoB Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RHOB sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

RhoB Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RHOB dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RHOB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de RhoB. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RHOB natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de RhoB au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie RhoB dans les cellules tumorales présentant une expression de RHOB silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.