Plasmide CRISPR/Cas9 KO Rho T1 (h): sc-401601

Présentation

RHOT1 code pour Rho T1 (Miro1), une GTPase atypique de la famille Rho ancrée à la membrane mitochondriale externe, qui couple les mitochondries au transport dépendant des microtubules via des interactions avec des adaptateurs TRAK et les moteurs kinésine/dynéine. En intégrant l’activité GTPase à la détection du calcium par des domaines EF-hand, Rho T1 coordonne le trafic, le positionnement et le renouvellement des mitochondries, influençant la polarisation neuronale, la fonction synaptique et la distribution de l’énergie. RHOT1 contribue également au contrôle qualité mitochondrial grâce à une communication croisée avec les voies de mitophagie dépendantes de PINK1/Parkin et à la régulation de la dynamique des organites aux sites de contact réticulum endoplasmique–mitochondries. La dérégulation du transport et de la mitophagie dépendants de RHOT1 a été associée aux réponses au stress cellulaire et est fréquemment étudiée dans le contexte de la neurodégénérescence et d’autres troubles caractérisés par une dysfonction mitochondriale.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Rho T1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RHOT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RHOT1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RHOT1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Rho T1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RHOT1 pour l'étude de la signalisation de Rho T1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RHOT1 essentiels à la fonction de Rho T1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RHOT1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Rho T1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Rho T1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RHOT1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Rho T1 plasmide HDR (h) et le Rho T1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RHOT1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RHOT1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.