Plasmide Double Nickase (h) Rho GAP p190-B: sc-405755-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Rho GAP p190-B correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Rho GAP p190-B Double Nickase (h) et le plasmide Rho GAP p190-B Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ARHGAP5. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Rho GAP p190-B Antibody (G-11): sc-393241
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Rho GAP p190-B | sc-405755-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Rho GAP p190-B | sc-405755-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ARHGAP5 code la protéine p190-B, une protéine activatrice de l’activité GTPasique (GAP) des GTPases de la famille Rho, qui constitue un régulateur négatif majeur et accélère l’hydrolyse du GTP afin de limiter la signalisation dépendante de RhoA. En modulant la dynamique du cytosquelette d’actine, le renouvellement des adhérences focales et la contractilité, p190-B influence la forme cellulaire, l’adhérence, la migration et la cytocinèse, en intégrant des signaux provenant des intégrines et des voies des facteurs de croissance. L’activité d’ARHGAP5 affecte des effecteurs en aval tels que ROCK et la phosphorylation de la chaîne légère de la myosine, reliant la signalisation Rho à la mécanotransduction et aux programmes de motilité cellulaire. Une dérégulation de la signalisation des GTPases Rho impliquant ARHGAP5 a été associée à une invasion altérée et à un remodelage tissulaire aberrant dans le cancer et d’autres pathologies caractérisées par un déséquilibre du cytosquelette.
Rho GAP p190-B Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ARHGAP5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ARHGAP5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ARHGAP5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ARHGAP5.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.