Plasmide Double Nickase (h) Rho G: sc-402608-NIC

RHOG code RhoG, une petite GTPase de la famille Rho qui alterne entre des états liés au GDP et au GTP afin de contrôler le remodelage du cytosquelette d’actine, la formation de replis membranaires (membrane ruffling) et le trafic vésiculaire. RhoG agit en amont des voies de signalisation Rac1 et Cdc42 et contribue à l’adhérence dépendante des intégrines, à une internalisation de type phagocytose et à la migration cellulaire directionnelle via la régulation de la formation des lamellipodes. Dans les contextes immunitaire et épithélial, l’activité de RHOG recoupe des voies qui gouvernent la chimiotaxie et le trafic endocytique, des processus fréquemment altérés lors de l’inflammation et de l’invasion tumorale. Une dérégulation de la signalisation de RhoG a été associée à une motilité anormale et à des phénotypes invasifs, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent pour les études de dynamique du cytosquelette et de réponses au microenvironnement.

Rho G Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RHOG dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RHOG. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RHOG. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RHOG.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.