Plasmide CRISPR/Cas9 KO Rho G (h): sc-402608

Présentation

RHOG code pour RhoG, un membre de la famille Rho des petites GTPases, qui agit comme un commutateur moléculaire reliant la signalisation des récepteurs au remodelage du cytosquelette d’actine. RhoG régule les ondulations membranaires, l’étalement cellulaire et la migration en coordonnant des voies qui convergent vers l’activité de Rac1 et de Cdc42, et en soutenant la dynamique d’adhésion dépendante des intégrines. Par ces processus, RHOG influence le trafic endocytaire et des fonctions des cellules immunitaires telles que la phagocytose et les réponses induites par les antigènes. La dérégulation de la signalisation de RhoG a été étudiée dans des contextes où une altération du contrôle du cytosquelette contribue à une motilité cellulaire anormale et à des phénotypes inflammatoires, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques sur l’invasion des cellules cancéreuses et le comportement des cellules immunitaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Rho G (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RHOG dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RHOG, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RHOG à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Rho G.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RHOG pour l'étude de la signalisation de Rho G, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RHOG essentiels à la fonction de Rho G
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RHOG pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Rho G plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Rho G plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RHOG. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Rho G plasmide HDR (h) et le Rho G (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RHOG pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RHOG définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.