Plasmide CRISPR d'Activation (h) Rho G: sc-402608-ACT

RHOG code RhoG, un membre de la famille des petites GTPases Rho qui agit comme un interrupteur moléculaire reliant les signaux extracellulaires au remodelage du cytosquelette d’actine. À l’état lié au GTP, RhoG coordonne des événements de signalisation qui régulent les ondulations membranaires, l’adhésion cellulaire, l’endocytose et la migration dirigée, via des interactions avec des effecteurs en aval et un dialogue avec les voies Rac1 et Cdc42. Ces processus influencent le trafic des cellules immunitaires, les réponses phagocytaires et la croissance des neurites, faisant de RHOG un nœud pertinent pour l’étude de la dynamique du cytosquelette et de la signalisation déclenchée par les récepteurs. Une activité de RhoG dérégulée a été associée à des altérations de la motilité cellulaire et à un comportement invasif dans des contextes pertinents pour la maladie, soutenant des investigations mécanistiques en biologie du cancer et dans des modèles de signalisation inflammatoire.

Rho G Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RHOG sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Rho G Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RHOG dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RHOG, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Rho G. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RHOG natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Rho G au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Rho G dans les cellules tumorales présentant une expression de RHOG silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.