RHBDL6 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404212

Descripción general

RHBDF2 codifica RHBDL6, una proteasa de serina intramembrana de la familia de las romboides que se localiza en endomembranas y contribuye a la proteólisis regulada de sustratos asociados a membrana. La actividad de RHBDL6 se ha vinculado con el control de calidad de proteínas, el tráfico intracelular y el recambio de componentes de señalización, integrándose con la degradación asociada al retículo endoplásmico (ERAD) y con programas adaptativos al estrés que moldean la proteostasis celular. A través de estos mecanismos, RHBDL6 puede influir en las salidas de señalización de factores de crecimiento e inflamatorias, incluidas vías relacionadas con la disponibilidad de ligandos de EGFR y la modulación de la inmunidad innata. La desregulación del procesamiento mediado por proteasas romboides se ha asociado con una remodelación patológica de redes de señalización en la biología del cáncer y en modelos de enfermedades inflamatorias, lo que respalda la investigación de la proteólisis dependiente de RHBDL6 en contextos relevantes para la enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO RHBDL6 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen RHBDF2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del RHBDF2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de RHBDF2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína RHBDL6.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en RHBDF2 para la investigación de la señalización de RHBDL6, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de RHBDF2 críticos para la función de RHBDL6
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de RHBDF2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido RHBDL6 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido RHBDL6 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus RHBDF2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR RHBDL6 (h) y el plásmido HDR RHBDL6 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología RHBDF2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana RHBDF2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.