Plasmide CRISPR/Cas9 KO RHAMM (h): sc-402431

Présentation

Le gène humain **HMMR** code **RHAMM** (récepteur de la motilité médiée par l’hyaluronane), une protéine de liaison à l’hyaluronane qui agit à la surface cellulaire et dans le cytoplasme pour coordonner la motilité, la polarité et l’organisation du fuseau mitotique. RHAMM intègre des signaux provenant de la matrice extracellulaire avec le remodelage du cytosquelette et interagit avec des réseaux de signalisation tels que **MAPK/ERK**, qui influencent la prolifération et la migration. Sa localisation régulée aux microtubules et à des structures associées au centrosome relie RHAMM à la progression du cycle cellulaire, à l’assemblage du fuseau et à la stabilité génomique. Une expression dérégulée de HMMR/RHAMM et une altération de la signalisation de l’hyaluronane ont été associées à des phénotypes oncogéniques, notamment une augmentation de l’invasion et des métastases, ce qui en fait une cible mécanistique pertinente pour la recherche sur le cancer et la migration cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RHAMM (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HMMR dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HMMR, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HMMR à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RHAMM.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HMMR pour l'étude de la signalisation de RHAMM, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de HMMR essentiels à la fonction de RHAMM
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HMMR pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RHAMM plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le RHAMM plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HMMR. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RHAMM plasmide HDR (h) et le RHAMM (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HMMR pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HMMR définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.