Plasmide CRISPR d'Activation (h) RGS9: sc-404442-ACT

RGS9 code le régulateur de la signalisation des protéines G 9, une protéine activatrice de la GTPase qui accélère l’arrêt du signal en aval des GPCR en favorisant l’hydrolyse du GTP par la sous-unité Gα. Dans les tissus neuronaux, RGS9 module les voies des récepteurs dopaminergiques et opioïdes et contribue au contrôle temporel de la signalisation des seconds messagers, notamment des processus dépendants de l’AMPc et de la régulation des canaux ioniques. C’est un composant clé de la récupération de la phototransduction dans la rétine, en influençant la cinétique de la signalisation visuelle et l’adaptation. Une expression ou une fonction altérée de RGS9 a été associée à des défauts de signalisation rétinienne et à un dérèglement de circuits neuromodulateurs impliqués dans des phénotypes liés au mouvement et à la récompense.

RGS9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RGS9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

RGS9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RGS9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RGS9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de RGS9. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RGS9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de RGS9 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie RGS9 dans les cellules tumorales présentant une expression de RGS9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.