Plasmide CRISPR/Cas9 KO RGS7 (h): sc-406720

Présentation

RGS7 (Regulator of G protein signaling 7) est une protéine activatrice de la GTPase qui accélère l’arrêt de la signalisation des RCPG en favorisant l’hydrolyse du GTP par la sous-unité Gα, en particulier dans les voies couplées à Gi/o. Elle joue un rôle majeur au sein de complexes de signalisation neuronaux, souvent en association avec Gβ5 et des ancrages membranaires tels que R7BP, contribuant à façonner la transmission synaptique, la dynamique de l’AMPc et la modulation des canaux ioniques. En contrôlant les voies effectrices des RCPG, RGS7 influence les réponses aux neurotransmetteurs et les programmes de signalisation dépendants de l’activité dans le système nerveux. La dérégulation des voies de signalisation liées à RGS7 a été étudiée dans le contexte de mécanismes de maladies neuropsychiatriques et neurodégénératives, où une altération du tonus des RCPG et de l’homéostasie synaptique est impliquée.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RGS7 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RGS7 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RGS7, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RGS7 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RGS7.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RGS7 pour l'étude de la signalisation de RGS7, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RGS7 essentiels à la fonction de RGS7
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RGS7 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RGS7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le RGS7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RGS7. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RGS7 plasmide HDR (h) et le RGS7 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RGS7 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RGS7 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.