Plasmide CRISPR d'Activation (h) RGS1: sc-404874-ACT

RGS1 (regulator of G protein signaling 1) est une protéine activatrice de la GTPase qui accélère l’arrêt des signalisations déclenchées par les GPCR en favorisant l’inactivation de la sous-unité Gα, modelant ainsi l’amplitude et la durée des signaux chimiokiniques et inflammatoires. Dans les cellules immunitaires, RGS1 contribue à ajuster la migration, les seuils d’activation et les réponses associées aux cytokines en modulant des voies en aval des récepteurs des chimiokines et d’autres entrées GPCR qui convergent vers la signalisation des seconds messagers et des MAPK. Une expression altérée de RGS1 a été associée à une dysrégulation immunitaire et à une susceptibilité accrue aux maladies inflammatoires, ce qui concorde avec son rôle dans le contrôle du trafic des leucocytes et des programmes d’activation. En tant que gène humain fortement pertinent pour l’immunobiologie, RGS1 est fréquemment étudié dans le contexte des transitions d’état cellulaire, de l’infiltration tissulaire et du remodelage des réseaux de signalisation.

RGS1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RGS1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

RGS1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RGS1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RGS1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de RGS1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RGS1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de RGS1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie RGS1 dans les cellules tumorales présentant une expression de RGS1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.