RGPD5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401666

Übersicht

RGPD5 (RANBP2-like and GRIP domain containing 5) ist ein primatenspezifisches Mitglied der RGPD-Genfamilie, das aufgrund der Homologie zu RANBP2/NUP358-assoziierten Domänen mit nukleozytoplasmatischen Transportprozessen in Verbindung gebracht wird. Proteine dieser Familie sollen den durch die Ran-GTPase regulierten Transport, die mitotische Progression sowie die räumliche Organisation von Proteinkomplexen an der Kernhülle beeinflussen und damit globale Genexpressionsprogramme mitprägen. RGPD5 wird häufig im Zusammenhang mit segmentalen Duplikationen auf Chromosom 2 und Kopienzahlvariabilität diskutiert – Eigenschaften, die eine lokusspezifische Interpretation in genomischen Studien erschweren. Eine Fehlregulation oder strukturelle Variation in Regionen der RGPD-Familie wurde in Krebsgenomik-Datensätzen im Zusammenhang mit proliferativen Phänotypen und Genominstabilität untersucht, was ihre Eignung als Ziel für mechanistische Studien zu nukleärem Transport und Zellzykluskontrolle stützt.

Das RGPD5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RGPD5-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RGPD5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RGPD5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die RGPD5-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RGPD5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der RGPD5-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RGPD5-Exone abzielen, die für die RGPD5-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RGPD5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom RGPD5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom RGPD5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RGPD5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das RGPD5 HDR-Plasmid (h) und RGPD5 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RGPD5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RGPD5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.