Plasmide CRISPR d'Activation (h) RGMc: sc-406186-ACT

Le gène humain **HFE2** code la molécule de guidage répulsif C (**RGMc**, aussi appelée **hémojuvéline**), une protéine membranaire ancrée au glycosylphosphatidylinositol (GPI) qui agit comme **co-récepteur** dans l’axe de signalisation **BMP/SMAD** contrôlant la transcription hépatique de l’**hepcidine**. En modulant la signalisation dépendante de **BMP6** et la phosphorylation en aval de **SMAD1/5/8**, RGMc intègre les signaux de détection du fer afin de maintenir l’homéostasie systémique du fer via la régulation de l’export du fer médié par la **ferroportine**. Une activité altérée de HFE2/RGMc est associée à une expression dérégulée de l’hepcidine et à des phénotypes de surcharge en fer, ce qui en fait un point d’entrée utile pour disséquer les réseaux du métabolisme du fer. Dans des modèles cellulaires, la perturbation des niveaux de RGMc permet des études mécanistiques de la dynamique de la voie BMP, des circuits de régulation de l’hepcidine et des programmes transcriptionnels impliqués dans la gestion du fer.

RGMc Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HFE2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

RGMc Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HFE2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HFE2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de RGMc. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HFE2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de RGMc au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie RGMc dans les cellules tumorales présentant une expression de HFE2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.