Plasmide CRISPR/Cas9 KO RGC32 (h): sc-404843

Présentation

RGCC code pour RGC32 (« response gene to complement 32 »), une protéine associée au cycle cellulaire induite par l’activation du complément et par divers signaux de stress. RGC32 participe à la régulation de la progression G2/M et de la prolifération en modulant la signalisation dépendante des cyclines et en interagissant avec des voies de kinases impliquées dans le contrôle des points de contrôle. Elle a également été associée à la biologie inflammatoire et vasculaire via ses effets sur l’activation et la migration des cellules endothéliales et des cellules musculaires lisses, ainsi que sur le remodelage de la matrice extracellulaire. Une expression dérégulée de RGC32 a été rapportée dans de multiples contextes pathologiques, notamment la prolifération associée aux tumeurs et le remodelage tissulaire lié à la fibrose, ce qui soutient son utilisation comme nœud mécanistique pour étudier le contrôle de la croissance et les réponses du microenvironnement.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RGC32 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RGCC dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RGCC, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RGCC à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RGC32.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RGCC pour l'étude de la signalisation de RGC32, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RGCC essentiels à la fonction de RGC32
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RGCC pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RGC32 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le RGC32 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RGCC. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RGC32 plasmide HDR (h) et le RGC32 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RGCC pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RGCC définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.