Plasmide CRISPR/Cas9 KO RFX4 (h): sc-406366

Présentation

RFX4 (regulatory factor X 4) est un facteur de transcription à hélice ailée (winged-helix) de la famille RFX, qui se lie à des éléments promoteurs de type X-box et contribue à coordonner des programmes d’expression génique spécifiques de certains types cellulaires. En biologie humaine, RFX4 est fortement associé à des processus de neurodéveloppement, notamment via la régulation de réseaux transcriptionnels qui influencent la ciliogenèse, le développement ventriculaire et les états de différenciation dans le système nerveux central. Une activité altérée de RFX4 a été associée à des perturbations de la structuration du cerveau et à des phénotypes neurodéveloppementaux, ce qui en fait un bon point d’entrée pour étudier les circuits régulateurs pilotés par des facteurs de transcription. Comme les protéines RFX peuvent interagir avec des voies contrôlant l’accessibilité de la chromatine et des modules de gènes liés aux cils, la perturbation de RFX4 est pertinente pour des études mécanistiques du contrôle des lignages neuronaux et des contextes de signalisation ciliaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RFX4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RFX4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RFX4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RFX4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RFX4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RFX4 pour l'étude de la signalisation de RFX4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RFX4 essentiels à la fonction de RFX4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RFX4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RFX4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le RFX4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RFX4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RFX4 plasmide HDR (h) et le RFX4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RFX4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RFX4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.