Plasmide CRISPR d'Activation (h) RFX1: sc-403144-ACT

RFX1 (regulatory factor X1) est un facteur de transcription se liant à l’ADN, qui reconnaît les motifs X-box et module l’activité des promoteurs au sein de réseaux géniques variés. Dans les cellules humaines, RFX1 participe à la régulation de programmes transcriptionnels liés au contrôle du cycle cellulaire, à l’état de la chromatine et à l’expression de gènes associés à l’immunité, avec des effets en aval sur la différenciation et les réponses au stress cellulaire. Une activité altérée de RFX1 a été étudiée dans le contexte du dérèglement du contrôle transcriptionnel observé en biologie du cancer et dans des processus à médiation immunitaire, où des variations d’expression peuvent reconfigurer la sortie des voies de signalisation. Parce qu’il se situe en amont de multiples cascades régulatrices, RFX1 est fréquemment utilisé comme nœud d’étude de l’architecture des promoteurs, de l’occupation par les facteurs de transcription et de la plasticité des réseaux géniques.

RFX1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RFX1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

RFX1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RFX1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RFX1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de RFX1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RFX1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de RFX1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie RFX1 dans les cellules tumorales présentant une expression de RFX1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.