Plasmide CRISPR/Cas9 KO RFLAT-1 (h): sc-404618

Présentation

KLF13 code le facteur de transcription RFLAT-1, une protéine à doigts de zinc de type Krüppel qui se lie à des éléments de promoteurs riches en GC afin de moduler des programmes d’expression génique contrôlant l’activation des lymphocytes et la signalisation inflammatoire. RFLAT-1 a été associé à la régulation de la transcription de chimiokines et de cytokines et peut s’interfacer avec des voies telles que les réponses transcriptionnelles dépendantes de NF-κB, influençant la différenciation et les états d’activation des cellules immunitaires. Une activité dérégulée de KLF13/RFLAT-1 a été étudiée dans des contextes de pathologie à médiation immunitaire et de signatures géniques inflammatoires altérées, ainsi que dans des réseaux transcriptionnels contribuant à une prolifération et une survie aberrantes dans des types cellulaires pertinents pour certaines maladies. Ces propriétés font de KLF13 un nœud utile pour disséquer la régulation transcriptionnelle sensible aux stimuli et les circuits de gènes immunitaires dans des systèmes modèles humains.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RFLAT-1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène KLF13 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du KLF13, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert KLF13 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RFLAT-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en KLF13 pour l'étude de la signalisation de RFLAT-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de KLF13 essentiels à la fonction de RFLAT-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de KLF13 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RFLAT-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le RFLAT-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus KLF13. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RFLAT-1 plasmide HDR (h) et le RFLAT-1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie KLF13 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles KLF13 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.