REV1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-425035

Descripción general

Rev1 codifica REV1, una polimerasa de ADN de la familia Y que actúa como andamiaje especializado y como transferasa de desoxicitidilo en la síntesis de ADN por translesión, permitiendo que la replicación continúe a través de lesiones voluminosas del ADN. REV1 coordina el bypass de lesiones al interactuar con otras polimerasas TLS y se integra con redes de respuesta al daño del ADN que preservan la progresión de la horquilla y la integridad del genoma. En células de ratón, la actividad de Rev1 influye en las tasas de mutagénesis y en el equilibrio entre el procesamiento de lesiones con errores y el procesamiento sin errores durante el estrés replicativo. Las vías dependientes de REV1 desreguladas son relevantes para estudios sobre inestabilidad genómica, mecanismos de carcinogénesis y la sensibilidad celular a agentes genotóxicos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO REV1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Rev1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Rev1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Rev1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína REV1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Rev1 para la investigación de la señalización de REV1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Rev1 críticos para la función de REV1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Rev1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido REV1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido REV1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Rev1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR REV1 (m) y el plásmido HDR REV1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Rev1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Rev1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.