Plasmide CRISPR/Cas9 KO REV1 (m): sc-425035

Présentation

Rev1 code REV1, une polymérase ADN de la famille Y qui agit comme un échafaudage spécialisé et comme transférase de désoxycytidine dans la synthèse d’ADN par trans-lésion, permettant à la réplication de se poursuivre à travers des lésions volumineuses de l’ADN. REV1 coordonne le contournement des lésions en interagissant avec d’autres polymérases TLS et s’intègre aux réseaux de réponse aux dommages de l’ADN qui préservent la progression de la fourche de réplication et l’intégrité du génome. Dans les cellules de souris, l’activité de Rev1 influence les taux de mutagenèse ainsi que l’équilibre entre le traitement des lésions avec erreurs et sans erreurs lors d’un stress réplicatif. La dérégulation des voies dépendantes de REV1 est pertinente pour l’étude de l’instabilité génomique, des mécanismes de carcinogenèse et de la sensibilité cellulaire aux agents génotoxiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO REV1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Rev1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Rev1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Rev1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine REV1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Rev1 pour l'étude de la signalisation de REV1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Rev1 essentiels à la fonction de REV1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Rev1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le REV1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le REV1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Rev1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le REV1 plasmide HDR (m) et le REV1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Rev1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Rev1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.