Particules Lentivirales d'Activation (h2) Rev-erbα: sc-401211-LAC-2

Le gène humain NR1D1 code le récepteur nucléaire Rev-erbα (NR1D1), un répresseur transcriptionnel liant l’hème qui relie le métabolisme cellulaire au rythme circadien en modulant l’expression des gènes au niveau des éléments de réponse Rev-erb/ROR. Rev-erbα agit au sein du cœur de l’horloge biologique pour limiter la transcription induite par BMAL1/CLOCK et coordonne des voies contrôlant le métabolisme des lipides et du glucose, la fonction mitochondriale et la signalisation inflammatoire, via des interactions avec des corépresseurs tels que NCoR/HDAC3. La dérégulation de NR1D1 a été associée à des altérations de la rythmicité circadienne et à des phénotypes métaboliques, avec une pertinence rapportée pour la biologie des maladies cardiométaboliques et inflammatoires. L’édition du génome ou la perturbation de NR1D1 est donc utile pour disséquer les réseaux transcriptionnels sous-jacents à la régulation circadienne, à l’homéostasie métabolique et au dialogue croisé immuno-métabolique dans des modèles cellulaires humains.

Les particules d'activation lentivirales Rev-erbα (h2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de NR1D1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Rev-erbα (h2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription NR1D1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Rev-erbα. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif NR1D1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.