Rent2 Double Nickaseプラスミド (m): sc-435860-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Rent2 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Rent2ダブルニカースプラスミド（m）およびRent2ダブルニカースプラスミド（m2）は、Upf2を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Rent2 抗体 (G-10): sc-374230
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Rent2 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-435860-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Rent2 Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-435860-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
マウスUpf2（Rent2）は、ナンセンス変異依存性mRNA分解（NMD）に必須のRNA監視因子をコードしている。NMDは、早期終止コドンを含む転写産物を検出して分解し、プロテオームの忠実性を維持する経路である。RENT2はUPF1やUPF3などの中核NMD因子と協調して働き、翻訳終結をmRNPのリモデリングと結び付けることで、mRNAの安定性、選択的スプライシングの帰結、ならびにストレス応答性トランスクリプトームの制御に影響を及ぼす。Upf2の活性は神経発生、免疫恒常性、生殖細胞系列の健全性に関与し、NMDの破綻は神経発達表現型、がんに関連する転写産物のバッファリング、さらには遺伝毒性／タンパク質毒性ストレスに対する応答の変化と関連付けられている。Upf2を実験的に改変する手法は、哺乳類細胞におけるRNA品質管理、翻訳監視、遺伝子発現の頑健性を検証する目的で広く用いられている。
Rent2 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Upf2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Upf2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Upf2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Upf2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。