Plasmide Double Nickase (h) Rent1: sc-402462-NIC

UPF1 (Rent1) code une hélicase/ATPase de l’ARN qui joue un rôle central dans la dégradation des ARNm médiée par les codons non-sens (NMD), une voie de surveillance de l’ARN conservée qui détecte les codons stop prématurés et favorise l’élimination des transcrits aberrants. En coordination avec les facteurs de terminaison de la traduction et des composants de la NMD tels que SMG1, SMG5/6/7, UPF2 et UPF3, UPF1 régule le contrôle qualité du transcriptome, le renouvellement des ARNm et la protéostasie. L’activité d’UPF1 s’articule également avec les réponses aux dommages de l’ADN, le maintien des télomères et la restriction antivirale de l’ARN, reliant le métabolisme de l’ARN à des voies plus larges de réponse au stress cellulaire. La dérégulation de la NMD et du traitement de l’ARN dépendant d’UPF1 a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux, à la biologie tumorale et à des études sur les infections virales, faisant d’UPF1 une cible largement utilisée pour les investigations mécanistiques dans les cellules humaines.

Rent1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus UPF1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de UPF1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de UPF1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de UPF1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.