Particules Lentivirales d'Activation (m) RelB: sc-422643-LAC

Relb code RelB, un membre de la famille NF-κB qui agit principalement dans la voie non canonique de NF-κB via l’hétérodimérisation avec p52 (NFKB2). RelB régule des programmes transcriptionnels contrôlant la maturation des cellules dendritiques, la survie des cellules B, l’organogenèse lymphoïde et la signalisation inflammatoire induite par les cytokines en aval de récepteurs tels que BAFFR, CD40, LTβR et RANK. Dans des modèles murins, une activité altérée de RelB perturbe l’homéostasie immunitaire et a été associée à l’inflammation chronique, à l’auto-immunité et à la régulation immunitaire liée aux tumeurs. Comme RelB intègre des signaux développementaux et inflammatoires, il est largement utilisé pour étudier la différenciation des cellules immunitaires, le dialogue entre stroma et système immunitaire, ainsi que des réseaux transcriptionnels NF-κB dépendants du contexte.

Les particules d'activation lentivirales RelB (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Relb dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales RelB (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Relb, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de RelB. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Relb ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.