RelB CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422643

Übersicht

Relb kodiert RelB, ein Mitglied der NF-κB/Rel-Familie, das überwiegend im nichtkanonischen NF-κB-Signalweg wirkt. RelB bildet häufig Heterodimere mit p52 (NFKB2), um Transkriptionsprogramme zu regulieren, die die Reifung dendritischer Zellen, die Organogenese lymphatischer Organe, das Überleben von B‑Zellen und entzündliche Signalübertragung nachgeschaltet an Rezeptoren wie BAFFR, CD40 und LTβR steuern. In Mausmodellen verknüpft die RelB-Aktivität die Kommunikation zwischen angeborenem und adaptivem Immunsystem, indem sie die Expression von Zytokinen und Chemokinen prägt und die Antigenpräsentation beeinflusst. Eine Fehlregulation der RelB-abhängigen Signalgebung ist mit aberranter Immunaktivierung und gestörter Immunentwicklung assoziiert, wodurch Relb ein nützliches Ziel für mechanistische Studien zu Entzündungsnetzwerken und zur Differenzierung von Immunzellen darstellt.

Das RelB CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Relb-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Relb-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Relb nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die RelB-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Relb-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der RelB-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Relb-Exone abzielen, die für die RelB-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Relb-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom RelB CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom RelB CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Relb-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das RelB HDR-Plasmid (m) und RelB HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Relb-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Relb-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.