Plasmide CRISPR d'Activation (m) RelB: sc-422643-ACT

Relb code RelB, un membre de la famille NF-κB/Rel qui agit comme un facteur de transcription central de la voie NF-κB non canonique. RelB forme fréquemment un hétérodimère avec p52 pour réguler des programmes géniques contrôlant la différenciation des cellules immunitaires, la présentation de l’antigène, l’organogenèse des organes lymphoïdes et la signalisation inflammatoire en aval de récepteurs tels que BAFFR, CD40 et le récepteur de la lymphotoxine-β. Dans les systèmes murins, l’activité de RelB influence la maturation des cellules dendritiques et le dialogue stroma–système immunitaire, façonnant des réseaux de cytokines et de chimiokines qui coordonnent l’homéostasie tissulaire. Une transcription dépendante de RelB dérégulée a été impliquée dans une activation immunitaire aberrante et des états inflammatoires chroniques, faisant de Relb un nœud utile pour l’étude des voies de signalisation et des réseaux transcriptionnels.

RelB Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Relb sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

RelB Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Relb dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Relb, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de RelB. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Relb natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de RelB au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie RelB dans les cellules tumorales présentant une expression de Relb silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.