Particules Lentivirales d'Activation (m) RELA/NFκB p65: sc-422642-LAC

La protéine Rela de la souris code le facteur de transcription RELA/NFκB p65, un composant central de la voie canonique NF-κB, qui forme un hétérodimère avec NFKB1 (p50) et transloque rapidement vers le noyau après activation, suite à la dégradation d’IκB médiée par IKK. RELA intègre des signaux provenant du TNF, de l’IL-1, des TLR, des récepteurs de l’antigène et du stress cellulaire afin de réguler des gènes contrôlant l’inflammation, les réponses immunitaires innée et adaptative, la survie cellulaire et la différenciation. Grâce à des interactions croisées avec les voies MAPK, JAK/STAT et IRF, RELA coordonne des programmes de cytokines et de chimiokines, l’adhésion, ainsi que des régulateurs de rétrocontrôle de l’homéostasie immunitaire. Une activité de RELA dérégulée est fréquemment utilisée comme lecture moléculaire de la physiopathologie inflammatoire et est pertinente dans des modèles d’auto-immunité, d’infection et de processus oncogéniques associés à l’inflammation.

Les particules d'activation lentivirales RELA/NFκB p65 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Rela dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales RELA/NFκB p65 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Rela, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de RELA/NFκB p65. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Rela ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.