Plasmide CRISPR d'Activation (h) RELA/NFκB p65: sc-400004-ACT

RELA code la sous-unité p65 de NF-κB, un facteur de transcription central qui contrôle des programmes géniques inductibles régissant l’inflammation, la signalisation immunitaire innée et adaptative, la survie cellulaire et les réponses au stress. Lorsqu’elle est activée par des voies telles que le récepteur du TNF, le récepteur de l’IL‑1, les récepteurs Toll‑like et la signalisation des récepteurs de l’antigène, p65 forme des dimères (le plus souvent avec NFKB1/p50), migre vers le noyau et régule l’expression de cytokines, chimiokines, molécules d’adhésion et facteurs anti‑apoptotiques. L’activité de RELA est modulée par la séquestration cytoplasmique médiée par IκB et par des modifications post‑traductionnelles dépendantes du stimulus, qui ajustent l’engagement avec la chromatine et la production transcriptionnelle. Une dérégulation de la signalisation NF‑κB/RELA est fréquemment associée à des états inflammatoires chroniques, à des programmes transcriptionnels oncogéniques et à des interactions avec le microenvironnement pertinentes pour la progression tumorale et l’échappement immunitaire.

RELA/NFκB p65 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RELA sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

RELA/NFκB p65 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RELA dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RELA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de RELA/NFκB p65. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RELA natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de RELA/NFκB p65 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie RELA/NFκB p65 dans les cellules tumorales présentant une expression de RELA silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.