Plasmide CRISPR d'Activation (m) Reg IIIγ: sc-422640-ACT

Reg3g code la protéine régénératrice dérivée des îlots 3 gamma (Reg IIIγ), une lectine de type C sécrétée, enrichie dans les compartiments des cellules épithéliales intestinales et des cellules de Paneth, qui contribue à la défense de la barrière muqueuse en se liant au peptidoglycane bactérien et en modulant les interactions hôte–microbiote. Son expression est fortement induite par les voies de détection des cytokines et des signaux microbiens, notamment la signalisation IL-22/STAT3 et les réponses immunitaires innées dépendantes des récepteurs de type Toll (TLR), reliant Reg IIIγ aux programmes de restitution épithéliale et d’activité antimicrobienne. Une activité altérée de la famille REG3 a été associée à des états inflammatoires au niveau des surfaces barrières, faisant de Reg3g un marqueur utile et un nœud mécanistique pour étudier l’inflammation intestinale, la dysbiose et les réponses au stress épithélial dans des modèles murins.

Reg IIIγ Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Reg3g sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Reg IIIγ Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Reg3g dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Reg3g, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Reg IIIγ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Reg3g natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Reg IIIγ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Reg IIIγ dans les cellules tumorales présentant une expression de Reg3g silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.