Plasmide CRISPR/Cas9 KO REEP6 (m): sc-427671

Présentation

Reep6 code la protéine 6 améliorant l’expression des récepteurs (REEP6), membre de la famille REEP, impliquée dans la mise en forme du réticulum endoplasmique (RE) tubulaire et dans la coordination du trafic des protéines au sein de la voie sécrétoire précoce. Dans les cellules de souris, REEP6 est associée à la courbure membranaire et à l’organisation de sous-domaines du RE qui favorisent le traitement et le transport efficaces des protéines transmembranaires, avec des effets en aval sur l’homéostasie cellulaire et les réponses au stress. REEP6 est particulièrement pertinente pour les études de biologie neuronale et sensorielle, car des protéines de la famille REEP ont été liées à des processus qui maintiennent des compartiments membranaires spécialisés et la protéostasie. La dérégulation de l’architecture du RE et des voies de trafic impliquant les protéines REEP est fréquemment étudiée dans le contexte de la neurodégénérescence et des dysfonctionnements du système sensoriel, ce qui étaye des investigations mécanistiques dans des modèles pertinents.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO REEP6 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Reep6 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Reep6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Reep6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine REEP6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Reep6 pour l'étude de la signalisation de REEP6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Reep6 essentiels à la fonction de REEP6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Reep6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le REEP6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le REEP6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Reep6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le REEP6 plasmide HDR (m) et le REEP6 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Reep6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Reep6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.