REEP6 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-427671

Descripción general

Reep6 codifica la proteína 6 potenciadora de la expresión del receptor (REEP6), un miembro de la familia REEP implicado en dar forma al retículo endoplásmico tubular y en coordinar el tráfico de proteínas dentro de la vía secretora temprana. En células de ratón, REEP6 se asocia con la curvatura de membrana y la organización de subdominios del RE que favorecen el procesamiento y el transporte eficientes de proteínas transmembrana, con efectos posteriores sobre la homeostasis celular y las respuestas al estrés. REEP6 es de gran relevancia para estudios de biología neuronal y sensorial, ya que las proteínas de la familia REEP se han vinculado a procesos que mantienen compartimentos de membrana especializados y la proteostasis. La desregulación de la arquitectura del RE y de las vías de tráfico que involucran proteínas REEP se explora con frecuencia en el contexto de la neurodegeneración y la disfunción del sistema sensorial, lo que respalda investigaciones mecanísticas en modelos pertinentes.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO REEP6 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Reep6 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Reep6 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Reep6 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína REEP6.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Reep6 para la investigación de la señalización de REEP6, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Reep6 críticos para la función de REEP6
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Reep6 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido REEP6 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido REEP6 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Reep6. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR REEP6 (m) y el plásmido HDR REEP6 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Reep6 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Reep6 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.