Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
REEP1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407088
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- REEP1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico REEP1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: REEP1 Anticuerpo (A-8): sc-393242
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
REEP1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-407088 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
REEP1 (proteína 1 potenciadora de la expresión del receptor) es una proteína de membrana residente del retículo endoplásmico (RE) que ayuda a dar forma a la arquitectura tubular del RE y favorece el tráfico de membranas, incluidas interacciones con procesos asociados a microtúbulos en neuronas. Contribuye a la dinámica del RE, a la comunicación RE–mitocondria y al mantenimiento de axones largos, donde la organización de membranas y la distribución de orgánulos están estrechamente acopladas a la homeostasis celular. La disfunción de REEP1 se ha relacionado con fenotipos neurodegenerativos hereditarios, de manera más destacada con la paraplejía espástica hereditaria autosómica dominante (SPG31), y se estudia en el contexto de la axonopatía y la vulnerabilidad de las neuronas motoras. Los modelos experimentales suelen investigar cambios dependientes de REEP1 en la morfología del RE, la distribución mitocondrial y vías de señalización de estrés como la respuesta a proteínas mal plegadas.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO REEP1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen REEP1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del REEP1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de REEP1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína REEP1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en REEP1 para la investigación de la señalización de REEP1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de REEP1 críticos para la función de REEP1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de REEP1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido REEP1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido REEP1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus REEP1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR REEP1 (h) y el plásmido HDR REEP1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología REEP1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana REEP1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.