Plasmide Double Nickase (r) REDD-1: sc-437314-NIC
- Espèces cibles: rat
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (r) REDD-1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide REDD-1 Double Nickase (r) et le plasmide REDD-1 Double Nickase (r2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant . Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (r) REDD-1 | sc-437314-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (r2) REDD-1 | sc-437314-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
REDD-1 (également connu sous le nom de DDIT4) est un régulateur inductible par le stress qui relie l’hypoxie, les dommages à l’ADN, le stress oxydatif et la limitation en nutriments à l’inhibition de la signalisation mTORC1 via l’axe TSC1/2–Rheb. Dans les cellules de rat, REDD-1 contribue à coordonner l’adaptation métabolique en limitant la synthèse protéique et la croissance cellulaire, tout en influençant l’autophagie, la fonction mitochondriale et l’homéostasie redox. Une expression altérée de REDD-1 a été associée à une dérégulation de l’activité mTOR et à des phénotypes de tolérance au stress pertinents pour la dysfonction métabolique, des modèles de lésions liées à l’ischémie et le remodelage tissulaire associé à l’inflammation. Comme REDD-1 se situe à un point de convergence des voies HIF-1, AMPK et mTOR, il est fréquemment utilisé pour explorer les circuits de réponse au stress ainsi que les programmes transcriptionnels et de protéostase en aval.
REDD-1 Le plasmide double nickase (r) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus dans les lignées cellulaires rat. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de . Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de . En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de .
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.