Plasmide Double Nickase (h) RecQL4: sc-403224-NIC

RECQL4 code une hélicase de l’ADN de la famille RecQ qui protège la stabilité du génome en favorisant la progression des fourches de réplication, la résolution de structures secondaires aberrantes de l’ADN et la coordination de la réparation de l’ADN. RecQL4 participe à l’initiation de la réplication et contribue à des voies incluant la recombinaison homologue et des processus de réparation dépendants de la résection des extrémités, ce qui aide à limiter le stress réplicatif et la fragilité chromosomique. La perturbation ou le dysfonctionnement de RECQL4 est associé à des syndromes héréditaires d’instabilité génomique et à une prédisposition au cancer, reflétant son rôle central dans le maintien d’un métabolisme fidèle de l’ADN. En conséquence, RECQL4 est fréquemment étudié dans le contexte de la signalisation des dommages à l’ADN, du contrôle du point de contrôle de la phase S et de la réparation associée à la réplication.

RecQL4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RECQL4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RECQL4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RECQL4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RECQL4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.