Recoverin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404106-ACT

ヒトのRCVRNは、網膜で豊富に発現するEFハンド型のCa2+結合タンパク質であるリカバリンをコードしており、Ca2+‐ミリストイルスイッチとして機能して視覚の光受容変換（フォトトランスダクション）を調節します。明順応に伴って細胞内Ca2+濃度が変化すると、リカバリンはロドプシンキナーゼ（GRK1）の活性を制御し、杆体・錐体視細胞におけるロドプシンのリン酸化ダイナミクスと回復（リカバリー）速度を規定します。GPCRシグナル伝達、Ca2+恒常性、cGMP依存的な視覚シグナル伝達における役割を通じて、リカバリンは網膜の正常なシグナル伝達と順応を支えます。リカバリンの発現量や免疫反応性の変化は網膜機能障害の状況と関連づけられており、RCVRNは視細胞生物学および視覚シグナル伝達ネットワークの機構解明研究において重要な標的となっています。

Recoverin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RCVRNの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Recoverin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RCVRN 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRCVRN転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Recoverinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRCVRN遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRecoverin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRCVRN発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRecoverin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。