Plásmido CRISPR de Activación (h) RECK: sc-402440-ACT

RECK (proteína rica en cisteína que induce reversión con motivos Kazal) es un regulador anclado a la membrana de la remodelación de la matriz extracelular que suprime la actividad de múltiples metaloproteinasas de matriz, incluidas MMP2, MMP9 y MT1-MMP. Al restringir la proteólisis en la superficie celular, RECK influye en la adhesión célula–matriz, la migración y la arquitectura tisular, con efectos posteriores sobre la angiogénesis y el comportamiento invasivo. RECK se ha vinculado a contextos de señalización que coordinan la dinámica epitelio–mesénquima y las interacciones con el estroma, y su expresión alterada se estudia con frecuencia en relación con la progresión tumoral y el potencial metastásico. Estas propiedades hacen de RECK un nodo útil para investigar la remodelación impulsada por proteasas, la regulación del microambiente y la comunicación cruzada entre vías que gobierna la invasión celular.

RECK El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RECK sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

RECK El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RECK en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RECK, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de RECK. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RECK y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de RECK en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía RECK en células tumorales con expresión de RECK silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.