Particules Lentivirales d'Activation (h) RCC1: sc-402078-LAC

Le gène humain **RCC1** code le *Regulator of Chromosome Condensation 1*, un facteur d’échange de nucléotides guanyliques (GEF) associé à la chromatine pour Ran, qui établit le gradient de RanGTP nécessaire au transport nucléocytoplasmique. En se couplant à la chromatine pendant la mitose, RCC1 soutient l’assemblage du fuseau, la reformation de l’enveloppe nucléaire et la ségrégation fidèle des chromosomes, ce qui le relie à des processus centraux de la progression du cycle cellulaire et de la stabilité du génome. L’activité de RCC1 s’inscrit à l’interface de voies régissant le contrôle du point de contrôle mitotique et les réponses aux dommages de l’ADN, via ses effets sur le trafic nucléaire et la dynamique mitotique. Une expression ou une fonction dérégulée de RCC1 a été associée à des phénotypes prolifératifs et à l’instabilité chromosomique observés dans de multiples contextes cancéreux, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques de la division cellulaire et du transport nucléaire.

Les particules d'activation lentivirales RCC1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de RCC1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales RCC1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription RCC1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de RCC1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif RCC1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.