Plasmide Double Nickase (m) RBP-Jκ: sc-422626-NIC

Rbpj code pour RBP-Jκ, un facteur de transcription se liant à l’ADN de manière spécifique à la séquence, qui constitue l’effecteur nucléaire central de la signalisation canonique Notch. Lors de l’activation du récepteur Notch, RBP-Jκ passe d’un rôle de répresseur transcriptionnel à celui d’activateur via le recrutement de NICD et de coactivateurs, régulant des gènes qui contrôlent les décisions de destinée cellulaire, la prolifération et la différenciation. Dans les systèmes murins, les programmes dépendants de RBP-Jκ sont essentiels à l’hématopoïèse, à la neurogenèse et au développement des cellules immunitaires, et la dérégulation des sorties transcriptionnelles Notch–RBP-Jκ est fréquemment utilisée comme cadre mécanistique pour étudier la transformation oncogénique et les phénotypes du développement. En tant que nœud intégrant les signaux Notch avec la chromatine et le contrôle transcriptionnel, Rbpj est largement étudié dans les voies qui gouvernent le maintien des cellules souches/progénitrices et l’engagement de lignée.

RBP-Jκ Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Rbpj dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Rbpj. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Rbpj. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Rbpj.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.