Particules Lentivirales d'Activation (h) RBMXL2: sc-409899-LAC

RBMXL2 (RNA binding motif protein, X-linked-like 2) est une protéine de liaison à l’ARN enrichie dans les cellules germinales, impliquée dans la régulation post-transcriptionnelle de l’expression génique, notamment l’épissage alternatif et la maturation de l’ARNm. En tant que membre de la famille RBM, RBMXL2 est associée aux processus d’assemblage du spliceosome et des ribonucléoprotéines (RNP), qui façonnent des isoformes de transcrits spécifiques à certains types cellulaires. La dérégulation de l’épissage de l’ARN et des réseaux de protéines liant l’ARN est largement pertinente pour la stabilité du génome, les programmes de différenciation et les réponses transcriptionnelles au stress, offrant un cadre pour examiner comment la maturation de l’ARN dépendante de RBMXL2 contribue aux phénotypes cellulaires. Comme l’expression de RBMXL2 est normalement restreinte et étroitement régulée, elle peut servir de point d’entrée utile pour étudier le contrôle de l’épissage spécifique aux tissus et ses liens avec des altérations du transcriptome associées aux maladies.

Les particules d'activation lentivirales RBMXL2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de RBMXL2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales RBMXL2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription RBMXL2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de RBMXL2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif RBMXL2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.