Plasmide CRISPR d'Activation (h) RBM4: sc-403993-ACT

RBM4 (RNA-binding motif protein 4) est une protéine multifonctionnelle se liant à l’ARN, qui régule l’épissage alternatif des pré‑ARNm, la stabilité des ARNm et le contrôle de la traduction, reliant le traitement de l’ARN aux transitions d’état cellulaire. Elle participe à des processus associés au spliceosome et contribue à coordonner des programmes d’expression génique lors de la différenciation, des réponses au stress et du remodelage des isoformes de transcrits lié au cycle cellulaire. Les choix d’épissage dépendants de RBM4 peuvent influencer les sorties de signalisation en modifiant l’équilibre des isoformes protéiques dans des voies qui gouvernent le métabolisme et l’organisation du cytosquelette. Une expression ou une activité dérégulée de RBM4 a été associée à des profils d’épissage aberrants observés dans des contextes de cancer ainsi que de maladies neuromusculaires et métaboliques, ce qui en fait un nœud utile pour étudier des mécanismes pathologiques centrés sur l’ARN.

RBM4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RBM4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

RBM4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RBM4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RBM4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de RBM4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RBM4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de RBM4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie RBM4 dans les cellules tumorales présentant une expression de RBM4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.