Plasmide CRISPR d'Activation (h) RBM38: sc-403488-ACT

RBM38 (RNA binding motif protein 38) est une protéine humaine de liaison à l’ARN qui module la régulation post-transcriptionnelle des gènes en contrôlant la stabilité, la localisation et la traduction des ARNm. Elle est impliquée dans le contrôle du cycle cellulaire et les programmes de réponse au stress grâce à des interactions spécifiques de séquence avec des transcrits cibles, influençant des voies liées à la prolifération et à la différenciation. L’activité de RBM38 s’articule avec des réseaux de maturation de l’ARN et peut façonner des circuits régulateurs associés à p53 en ajustant l’expression de facteurs impliqués dans les réponses de checkpoint. Une dérégulation de l’expression de RBM38 a été rapportée dans plusieurs contextes pertinents pour les maladies, ce qui en fait un nœud utile pour étudier des mécanismes centrés sur l’ARN qui affectent le phénotype cellulaire.

RBM38 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RBM38 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

RBM38 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RBM38 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RBM38, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de RBM38. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RBM38 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de RBM38 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie RBM38 dans les cellules tumorales présentant une expression de RBM38 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.