Plasmide Double Nickase (h) RBM35A: sc-405645-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) RBM35A correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide RBM35A Double Nickase (h) et le plasmide RBM35A Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ESRP1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) RBM35A | sc-405645-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) RBM35A | sc-405645-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ESRP1 (RBM35A) est une protéine épithéliale régulatrice de l’épissage qui se lie au pré‑ARNm et oriente des programmes d’épissage alternatif distinguant les isoformes transcriptomiques épithéliales des isoformes mésenchymateuses. Elle contribue au maintien de l’identité épithéliale en contrôlant les choix d’épissage de gènes impliqués dans l’adhésion cellule‑cellule, l’organisation du cytosquelette et la transduction du signal, influençant ainsi des processus tels que la transition épithélio‑mésenchymateuse (EMT) et la différenciation épithéliale. Par une régulation coordonnée de l’inclusion et de l’exclusion d’exons, ESRP1 façonne des voies liées à la polarité cellulaire et à la migration, et sa dérégulation est fréquemment étudiée dans le contexte des transitions développementales et des changements phénotypiques associés aux tumeurs. Des réseaux d’épissage dépendants d’ESRP1 altérés ont été associés à des modifications d’isoformes liées à l’invasion et à la plasticité de lignée, ce qui en fait une cible courante dans les études mécanistiques du métabolisme de l’ARN et de la biologie du cancer.
RBM35A Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ESRP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ESRP1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ESRP1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ESRP1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.