Plasmide CRISPR d'Activation (h) RBM10: sc-418527-ACT

RBM10 code une protéine liant l’ARN qui régule l’épissage alternatif, la stabilité des ARNm et l’assemblage du spliceosome, orientant le choix des isoformes de transcrits au sein de programmes géniques variés. L’épissage dépendant de RBM10 influence la progression du cycle cellulaire, l’apoptose et la différenciation, et s’articule avec le contrôle post‑transcriptionnel des sorties de signalisation, notamment des composants de la voie Notch et d’autres transcrits régulant la croissance. Une activité de RBM10 déréglée ou des mutations ont été associées à des phénotypes anormaux de maturation de l’ARN observés dans plusieurs contextes cancéreux ainsi que dans des troubles congénitaux du développement, ce qui en fait un nœud d’étude pertinent pour comprendre comment des perturbations de l’épissage remodèlent les états cellulaires. En tant que régulateur nucléaire du métabolisme de l’ARN, RBM10 est fréquemment étudié pour son impact sur l’utilisation des exons à l’échelle du transcriptome, les réseaux d’expression génique et la maturation de l’ARN en réponse au stress.

RBM10 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RBM10 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

RBM10 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RBM10 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RBM10, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de RBM10. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RBM10 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de RBM10 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie RBM10 dans les cellules tumorales présentant une expression de RBM10 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.