Plasmide CRISPR/Cas9 KO RbAp46 (h): sc-405076

Présentation

RBBP7 code pour RbAp46, une protéine de liaison aux histones à répétitions WD40 qui constitue un composant central de plusieurs complexes de régulation de la chromatine, notamment NuRD/HDAC, Sin3A et PRC2, et qui s’associe à CAF-1 lors de l’assemblage des nucléosomes. Par ces interactions, RbAp46 contribue à coordonner la désacétylation des histones, le remodelage de la chromatine et le silençage épigénétique des gènes, influençant les programmes transcriptionnels, l’assemblage de la chromatine couplé à la réplication de l’ADN et la stabilité du génome. Des altérations de la régulation de la chromatine dépendante de RBBP7 ont été associées à une prolifération dérégulée, à des défauts de différenciation et à des phénotypes de réponse au stress observés dans des contextes de cancer et de maladies du développement. En tant que facteur nodal de la chromatine, RbAp46 est fréquemment étudiée dans les voies contrôlant la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et la transcription spécifique de lignée.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RbAp46 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RBBP7 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RBBP7, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RBBP7 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RbAp46.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RBBP7 pour l'étude de la signalisation de RbAp46, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RBBP7 essentiels à la fonction de RbAp46
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RBBP7 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RbAp46 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le RbAp46 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RBBP7. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RbAp46 plasmide HDR (h) et le RbAp46 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RBBP7 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RBBP7 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.