Plasmide CRISPR d'Activation (h) RASL11A: sc-409106-ACT

RASL11A code une petite GTPase de type Ras impliquée dans la régulation de réseaux de transduction du signal qui couplent la liaison et l’hydrolyse du GTP au contrôle en aval de la croissance cellulaire, de la différenciation et de l’organisation du cytosquelette. En tant que membre de la vaste superfamille Ras, RASL11A est susceptible d’influencer des voies liées à MAPK ainsi que d’autres voies dépendantes des GTPases qui coordonnent le trafic membranaire et l’homéostasie cellulaire. Une dérégulation de la signalisation de la famille Ras est largement associée à la transformation oncogénique et à des phénotypes de réponse au stress, ce qui rend l’expression et l’activité de RASL11A pertinentes pour étudier l’ajustement fin des voies de signalisation en biologie du cancer. La dynamique de son expression endogène soutient également des travaux sur des programmes de signalisation spécifiques des tissus et des réponses aux perturbations dépendantes du contexte.

RASL11A Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RASL11A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

RASL11A Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RASL11A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RASL11A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de RASL11A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RASL11A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de RASL11A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie RASL11A dans les cellules tumorales présentant une expression de RASL11A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.