Plasmide CRISPR/Cas9 KO Ras-GRF2 (h): sc-404141

Présentation

RASGRF2 code Ras-GRF2, un facteur d’échange de nucléotides guanyliques régulé par le calcium et les phospholipides, qui active Ras et d’autres petites GTPases apparentées afin de contrôler la dynamique de signalisation MAPK/ERK. Ras-GRF2 intègre des signaux issus de l’activité neuronale et de la signalisation médiée par des récepteurs pour influencer la plasticité synaptique, la croissance des neurites et le remodelage du cytosquelette via des kinases en aval et des voies de la famille Rho. En modulant des programmes transcriptionnels dépendants de Ras, RASGRF2 affecte, de manière contextuelle, la prolifération cellulaire et les états de différenciation. Un couplage dérégulé de la voie Ras impliquant Ras-GRF2 a été étudié en neurobiologie et dans des modèles de signalisation liés au cancer, où une activation altérée des GTPases peut remodeler les réponses de croissance et de survie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Ras-GRF2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RASGRF2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RASGRF2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RASGRF2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Ras-GRF2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RASGRF2 pour l'étude de la signalisation de Ras-GRF2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RASGRF2 essentiels à la fonction de Ras-GRF2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RASGRF2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Ras-GRF2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Ras-GRF2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RASGRF2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Ras-GRF2 plasmide HDR (h) et le Ras-GRF2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RASGRF2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RASGRF2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.